“睡美人”CAR-T疗法完成首例实体瘤患者给药，基于转座子技术的细胞疗法优势明显丨医麦猛爆料

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2019年8月6日/医麦客 eMedClub/--昨日，Precigen宣布了其 PRGN-3005 UltraCAR-T™在晚期、复发性铂耐药卵巢癌、输卵管癌或原发性腹膜癌患者1期临床试验中的首例患者给药，(临床试验标识:NCT03907527)。

此次试验与华盛顿大学和弗雷德哈钦森癌症研究中心合作进行，旨在评估评估经腹腔注射(IP)或静脉注射(IV)给药的PRGN‐3005 UltraCAR-T的安全性和最大耐受剂量。研究人群包括晚期(III/IV期)复发性卵巢癌、输卵管癌和原发性腹膜癌患者，这些患者对铂耐药，在接受标准护理治疗后进展，或没有资格接受已知临床效益的现有治疗。

这是该公司继今年6月宣布完成PRGN-3006 UltraCAR-T™治疗复发或难治性急性髓性白血病（AML）或高风险骨髓增生异常综合征（MDS）患者第1/1b期临床试验的首例患者给药（临床试验标识符：NCT03927261）后，第二个进入临床阶段的非病毒载体CAR-T。

PRGN-3005和PRGN-3006都是基于Precigen公司“睡美人”技术平台（SB系统）的多基因CAR-T疗法。利用该平台先进的非病毒传递系统，共表达嵌合抗原受体、膜结合白细胞介素-15（mbIL15）和一个靶向适应症并实现精确控制的开关。

基于此的Precigen的UltraCAR-T平台具有以下显著优点:

• 使用多基因载体进行非病毒基因转移，以表达多种效应基因进而有更好的肿瘤靶向的特异性以及控制性，而且消除了对病毒载体的需要。
• mbIL15的共表达，可增强UltraCAR-T细胞免疫激活的特异性和持久性，有助于解决T细胞衰竭的问题，这也是当前CAR-T疗法的常见问题。

• 控制开关实现对T细胞的控制，改善潜在的安全性。
• 使用专有的非病毒基因转移技术可快速制造UltraCAR-T细胞，无需离体增殖，从而大大缩短了患者的等待时间。

目前的嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）治疗的主流方式是需要使用基因技术对T细胞进行修饰，并在患者体外繁殖。然而无论是需要基因修饰的细胞疗法，还是以基因传递和修饰为治疗手段的基因疗法，目前大多数都是基于病毒载体的。但是病毒载体的制造过程复杂、成本昂贵且受到严格控制；监管上，在临床试验的早期阶段难以符合cGMP的所有方面。

此外，病毒载体在载体效力和安全性评估以及运输上都存在挑战。因此，载体的生产制造和供应可能是细胞和基因治疗领域中最大限制因素之一。而基于转座子技术的非病毒载体基因传递的目标是改变基因传递方式并消除细胞疗法中在体外培养（T）细胞的需求，这将加速治疗并降低成本。

基于SB、PB转座子技术的细胞疗法概况

基于转座子技术的非病毒载体系统除了上文提到的SB转座子，还有PB转座子，它们都可以克服瞬时表达的问题，具有固有的稳定表达整合入核基因的能力。近年来应用于CAR-T细胞疗法中取得了较大的进展。

睡美人Sleeping Beauty转座系统

“睡美人” 转座系统是Tc1/mariner 转座子超家族中的一员，已沉寂了一千多万年，直到1997年，Ivics等才揭示了其转座活性。

转座时转座序列和转座酶，类似于“剪切粘贴”的方式，转座子载体系统转座时可携带一段外源DNA 序列，利用这一特性可以用于转基因、基因筛选及基因治疗等领域具有很好的应用前景。它能在体外培养的大多数脊椎动物的细胞中发生转座，介导外源基因的稳定整合和长期表达。

“睡美人”转座子系统

目前，SB系统已发展为非病毒载体，是除了慢病毒、逆转录病毒制备CAR-T之外的另一种非病毒的基因转染新方法。作为更快更便宜的替代方案，SB系统将来很可能替代目前繁琐的基因敲除和RNA干扰技术, 在功能基因组学研究及基因治疗等领域发挥重要的作用。

用非病毒方式进行操作，提高了安全性并且可以非常快速地制备CAR-T细胞（两天甚至更短）是该技术最大的两个亮点。

代表公司：

• Ziopharm Oncology
• Precigen

Ziopharm Oncology开创了制造CAR-T细胞疗法的非病毒方法。该公司正在推进基于转座子/转座酶的睡美人(Sleeping Beauty)系统，使用电穿孔技术将DNA质粒转移基因到T细胞，以加速CD19的靶向性。
目前已经进行了两项临床试验，以建立“睡美人”技术的概念验证：2018年6月，Ziopharm向FDA申请一期临床试验,以评估用睡美人技术制备的CAR-T细胞能否应用于复发或难治性CD19 +白血病和淋巴瘤患者。2019年6月11日，美国国家癌症研究所NCI提交的研究性新药(IND)申请获得美国FDA批准，以评估实体瘤临床试验中基于Ziopharm睡美人(Sleeping Beauty, SB)平台的TCR-T细胞疗法。2019年下半年，Ziopharm将在德克萨斯大学MD安德森癌症中心开始第一阶段试验，向患者输注在两天或更短时间内通过基因转移生产的CD19特异性CAR-T细胞。
另外，Ziopharm和TriArm在2018年12月20日宣布创办合资公司Eden BioCell，以在中国（包括澳门、香港、台湾）和韩国进行睡美人CAR-T疗法的临床和商业化开发。根据协议条款，TriArm出资3500万美元，Ziopharm授权第三代睡美人CD19特异性CAR-T细胞疗法。对于Eden BioCell，双方各持股50%。

Precigen是Intrexon的全资子公司，于2018年10月与Ziopharm签订了新的许可协议，紧接着就于2018年12月24日宣布，FDA批准了其基于“睡美人”技术平台（SB系统）的多基因CAR-T疗法PRGN-3006的研究性新药（IND）申请，将进行针对复发或难治性急性髓性白血病（AML）和高风险骨髓增生异常综合征（MDS）治疗的一期临床研究。2019年2月11日Precigen又宣布，FDA批准了其PRGN-3005 IND申请，将进行针对晚期铂类耐药卵巢癌的CAR-T治疗一期临床研究。目前这两项CAR-T疗法均已完成临床试验的首例患者给药。

piggyBac转座系统

piggyBac转座子最初于1983年在飞蛾中发现，2005年被成功用于哺乳动物细胞的基因操作。像其他转座子一样，piggyBac有两个组件：一个转座子和一个转座酶。非病毒piggyBac平台不使用病毒载体。对于这种技术最重要的是，转座酶能够以完全无缝的方式切除转座子，不留下任何序列或突变。可有效地将大量CAR分子基因传递给T细胞，拥有产生的Tscm百分比高、装载量大（超过200 kb已被证明）、降低风险、稳定高效、生产成本低时间短等优点。
PB转座子（图片来源:cyagen.com）代表公司：

• Poseida Therapeutics
• 上海细胞治疗集团

2019年4月，完成由诺华领投的1.42亿美元C轮融资。该公司正在推进针对血液系统恶性肿瘤和实体肿瘤的自体和同种异体CAR-T候选产品系列，自体CAR-T疗法P-BCMA-101：P-BCMA-101包括靶向B细胞成熟抗原（BCMA）的、可自我更新、长寿命的干细胞记忆T细胞，是一种基于Poseida的piggyBac平台非病毒载体技术开发的自体CAR-T疗法。该方法成本较低，而且基于此方法可产生高百分比的干细胞记忆T细胞（Tscm）。目前正处于治疗复发/难治性多发性骨髓瘤的1期临床开发阶段。基于其在I期临床试验中（NCT03288493）有希望的安全性和有效性数据，2019年5月获FDA授予的“孤儿药”称号。异体CAR-T产品P-BCMA-ALLO1：Poseida还将高保真NextGEN CRISPR基因编辑系统与非病毒piggyBac DNA转座技术结合使用，主要在高度可取的记忆性干细胞样T细胞亚群中产生CAR-T细胞，开发了现货off-the-shelf同种异体或通用供体CAR-T候选产品P-BCMA-ALLO1，预计将在2020年初进入第一阶段临床试验。P-BCMA-ALLO1克服了自体CAR-T细胞面临的诸如制造时间、重现性、一致性和成本等重大挑战，以及由病毒载体产生的CAR-T细胞倾向于由分化的T细胞亚群组成，与较差的体内耐受性相关等这些限制，可以给予任何多发性骨髓瘤(MM)患者。

2019年4月，上海细胞治疗集团基于PB转座子非病毒载体技术的以CD19为靶点的CAR-T细胞治疗新药CD19 CAR-T细胞注射液（BZ019）获得药监局许可开展临床试验，用于CD19阳性的成人复发或难治性弥漫大B细胞淋巴瘤，包括原发纵膈大B细胞淋巴瘤及发生转化的滤泡性淋巴瘤的治疗。这也是国内首家利用非病毒载体系统制备CAR-T细胞治疗新药获得IND受理的案例。

结 语

我们可以看到，几项进入临床阶段的基于转座子非病毒载体传递基因的CAR/TCR-T细胞疗法也是少有挑战实体瘤的。PRGN-3005的主要研究者之一Nora Disis表示，“给第一个病人注射PRGN-3005 UltraCAR-T代表着CAR-T细胞治疗实体肿瘤的重要进展。

参考来源：

https://www.biospace.com/article/releases/precigen-announces-first-patient-dosed-in-phase-1-study-of-prgn-3005-ultracar-t-in-patients-with-advanced-recurrent-platinum-resistant-ovarian-fallopian-tube-or-primary-peritoneal-cancer/

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